ПЦР - диагностика

ПЦР - диагностика

    Для своевременного и точного выявления диагноза и лечения заболеваний, вызываемых различными инфекционными агентами, необходима точная диагностика. Для этой цели чаще всего применяются современные методы молекулярной биологии, например метод ПЦР при выявлении ДНК.  Метод ПЦР – полимеразной цепной реакции, без преувеличения можно назвать самым значительным достижением в лабораторной диагностике за последние десятилетия.

    При выявлении ДНК метод ПЦР включает три стадии:

   На первой стадии, при температуре выше 94⁰С происходит денатурация двойной цепи исследуемой ДНК, т.е. стадия денатурации;

   На второй стадии   два олигонуклеотида-праймера, строго специфичные  к определенным участкам антипараллельных цепей исследуемой ДНК, связываются с этими участками ДНК;

   На третьей стадии, при температуре 70-72⁰ С,  с  участием термофильной ДНК-полимеразы и дезоксинуклеозид-5ў-трифосфатов происходит синтез новых цепей ДНК. Инициация синтеза ДНК происходит в местах связывания олигонуклеотидов-праймеров с исследуемой ДНК, матрицей для синтеза служат исходные цепи ДНК.

   Основным достоинством метода ПЦР является чрезвычайно высокая чувствительность анализа. Другим достоинством метода является то, что для ПЦР-диагностики практически всех инфекционных заболеваний может быть использован один набор оборудования, универсальные процедуры подготовки пробы и постановки анализа, а также незначительно отличающиеся наборы реактивов.

       Высокая чувствительность и специфичность, непосредственное обнаружение инфекционного агента и возможность проведения генотипирования,  определяют широкую область применения метода ПЦР в клинической диагностике.

  В настоящее время ПЦР-диагностика  используется для:

• выявления персистирующих, латентных и рецидивирующих форм инфекций;
• ранней диагностики инфекционных заболеваний у серонегативных пациентов, когда лечение наиболее эффективно;
• контроля эффективности лечения;
• диагностики оппортунистических инфекций, часто протекающих на фоне иммунодефицита, вследствие чего постановка диагноза только по результатам серологических исследований затруднена из-за имеющихся несоответствий между параметрами иммунного ответа и протекания заболевания;
• разрешения сомнительных результатов серологических исследований;
• эпидемиологических исследований;
• выявления наиболее патогенных штаммов инфекционных агентов;
• исследования инфекционности пулированных образцов крови и ее продуктов, применяемых в терапии;
• определения резистентности к лекарственным препаратам.

   Метод ПЦР используется для постановки или подтверждения диагноза, контроля терапии в акушерско-гинекологической практике, неонтологии, педиатрии, урологии, венерологии, нефрологии, гепатологии, пульмонологии, офтальмологии, неврологии, фтизиатрии и др.

   Но не смотря на все свои преимущества, в связи с высокой чувствительностью, существует опасность получения ложноположительных результатов  в силу переноса через предметы и реагенты как самой ДНК-матрицы, так и продуктов ПЦР – ампликонов, получаемых в больших количествах в течение ежедневной работы.

   Причинами получения ложноположительных результатов являются три вида контаминаций:

перекрестная контаминация от пробы к пробе,  приводящая к появлению спорадических ложноположительных результатов;

контаминация рекомбинантными плазминами, содержащими клонированные последовательности детектируемого гена, часто использующимися в качестве положительного контроля;

контаминация продуктами амплификации, являющаяся наиболее частой причиной ложноположительных результатов, так как в процессе ПЦР-генодиагностики ампликоны накапливаются в больших количествах и очень легко переносятся с аэрозолями и через приборы.

  Своевременное выявление этиологических агентов внутриутробных, интранатальных и постнатальных инфекций у новорожденных позволяет врачам провести эффективную целенаправленную терапию и значительно снизить тяжелые последствия заболеваний, а также количество летальных исходов. По результатам этих исследований в настоящее время оформляются методические рекомендации по диагностике внутриутробных инфекций методом ПЦР.  

Консультация менеджера по выбору санатория: +7(961) 444-23-23; +7(928) 313-96-46; +7(918) 782-38-46. Звоните! Всего запрошено консультаций - 8725650